等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液，用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇：水(83：17)為流動(dòng)相測定柱效及分離度塔板數(shù)在2～3萬/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好。為防止柱污染，常用1個(gè) 50mm長，4~5mm內(nèi)徑，裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護(hù)柱(預(yù)柱)接在主柱之前，以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng)，以洗去鹽類、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。

 

　　2、流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中，經(jīng)過有濾過頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱，zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法，即自洗脫開始到結(jié)束，溶劑的配比恒定。

 

　　另一類為梯度洗脫法,即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離，而整個(gè)色譜過程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中。

 

　　3、LC液相色譜儀適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測器應(yīng)用于對(duì)紫外光有吸收的藥物，大多數(shù)藥物分子對(duì)紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測限有0.1μg左右。

 

　　紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器，既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測，又能提高測定靈敏度，重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測器對(duì)能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。80年代應(yīng)用激光替代氙燈光源，光強(qiáng)度增加了3~4倍，對(duì)某些藥物的檢測限可達(dá)pg級(jí)。電化學(xué)檢測器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團(tuán)的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流，放大后檢測，檢測限pg級(jí)。

 

　　4、數(shù)據(jù)處理現(xiàn)代LC液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，除記錄譜外，還能自動(dòng)記錄峰的保留時(shí)間，能自動(dòng)積分求算峰面積，并能按照預(yù)定的程序作有關(guān)計(jì)算，報(bào)告分析結(jié)果。